非靶向代谢组学

8-非靶向代谢 项目名称 非靶向代谢组学
项目周期 40天
项目报价 800元/样本

项目简介

非靶向代谢组学是指采用 LC-MS、GC-MS、NMR技术,无偏向性的检测细胞、组织、器官或者生物体内受到刺激或扰动前后所有小分子代谢物(主要是相对分子量1000 Da以内的内源性小分子化合物)的动态变化,并通过生信分析筛选差异代谢物,对差异代谢物进行通路分析,揭示其变化的生理机制。

报价说明

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客户提供

  • 样品

样品要求

样品 要求
生物体液(血浆、血清、尿液等) 全血浆为采用抗凝剂抗凝后, 除去血细胞的液体;血清为血液凝固后的上清液;尿液需新鲜, 未做任何处理。血浆,血清,尿液样本均需采集后,立即置入‐80 ℃低温冷冻保存。血浆,血清样品总体积建议 200 µl,不低于 100 µl; 尿液建议 1mL,不低于 200 µl 。
组织(植物、动物以及昆虫等) 样品均需新鲜采集后,立即置入液氮中速冻后,-80℃低温冷冻保存。每个样品总重量建议 100 mg,不低于 50mg。
微生物等细胞样本样品 必须为经过淬灭,即将微生物迅速用液氮或者有机溶剂(-40℃)灭活,使其代谢瞬间停止。菌体要求大于 10mg,菌液要求大于 500ul,细胞个数不少于 107个。
备注:
1、建议送样量能满足实验的所有测试需求;
2、最低送样量能保证基本测试需求,但有一定的实验风险,具体以最终实验结果为准。

服务流程

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结果交付

一、数据库介绍

  1. HMDB数据库

HMDB数据库是目前收录人源代谢物最全的数据库之一。其他物种也可使用HMDB数据库。数据库内的数据涵盖以下三类:a.化学数据,b.临床数据,c.分析生物学和生物化学数据。水溶性和脂溶性代谢物均收录其中。此外,收录信息还提供其他数据库的链接(如:KEGG,PubChem等),方便查阅。其他哺乳类动物也可使用此库。

  1. KEGG数据库

KEGG数据库的构建旨在了解生物系统(如细胞,组织等)中基因、蛋白及代谢物的功能及相互作用关系。可以查询到与代谢物相关的代谢通路、疾病及药物研发等信息。

二、数据分析

  1. 定量分析

单变量分析:代谢组学数据分析中常用 Wilcoxon 秩检验(或 T 检验,方差分析等)和变异倍数分析等单变量分析方法对数据所反映的数量变动进行分析。该项目是采用的 T 检验(p-value)和变异倍数分析(Fold change)。最终结果以火山图(Volcano plot)形式呈现 Fold change 和 p-value 两个指标。

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火山图

多变量分析:要从大量数据中发现代谢组学潜在标志物,除了单变量分析还需借助多变量统计分析方法,常用的多变量分析方法有主成分分析(PCA)和偏最小二乘法-判别分析(PLS-DA)。

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PCA分析

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PLS-DA判别分析模型图

  1. 鉴定结果分析

对根据差异筛选条件:1)VIP≥1;2)fold-change≥2 或者≤0.5;3)p-value<0.01 筛选出的差异离子,进一步进行加和形式的筛选。使用含有有效加和形式的差异离子进行鉴定。

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差异离子鉴定列表示意图

  1. 通路分析

差异代谢物可以通过代谢通路分析帮助了解代谢物所参与的主要生化代谢途径和信号转导通路。本项目基于 KEGG 数据库进行代谢通路的注释。

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代谢通路示意图

  1. 实验结果质控

QC 样本在样本检测前用于平衡“色谱-质谱”系统,在样本检测过程中用于评价质谱系统 的稳定性。

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